Thioglycollate Broth là gì?
Môi trường Thioglycollate Broth là môi trường đa năng để nuôi cấy vi khuẩn kỵ khí, vi khuẩn hiếu khí và được khuyến nghị là một trong những môi trường để thử nghiệm độ vô trùng của các sản phẩm sinh học.
Môi trường Thioglycollate hoạt động như một môi trường tăng sinh có thể chứa hoặc không chứa chất chỉ thị oxy hóa, resazurin , được sử dụng rộng rãi trong chẩn đoán vi khuẩn.
Môi trường này không yêu cầu thùng chứa kỵ khí hoặc vật liệu bịt kín đặc biệt để nuôi cấy vi khuẩn kỵ khí. Natri thioglycolate trong môi trường tiêu thụ oxy và tạo điều kiện cho vi khuẩn kỵ khí bắt buộc phát triển.
Thành phần môi trường Thioglycollate Broth
| Thành phần | Hàm lượng (g/L) |
| Trypton | 15,0 |
| L-Cystine | 0,5 |
| Glucose | 5,5 |
| Chiết xuất nấm men | 5,0 |
| Natri clorua | 2,5 |
| Natri Thioglycolate | 0,5 |
| Resazurin | 0,001 |
| pH cuối cùng (ở 25°C): 7,1 ± 0,2 |
Hòa tan các thành phần, bột đã khử nước, trong nước (29g trong 1000ml nước tinh khiết/nước cất). Đun sôi và hòa tan hoàn toàn môi trường. Phân phối vào các ống nghiệm và khử trùng trong nồi hấp ở 121°C trong 15 phút.
Nguyên lý của môi trường Thioglycollate Broth
Ba thành phần chính góp phần duy trì trạng thái bán kỵ khí của môi trường: Natri thioglycolate, Cystine và agar.
- Glucose, Trypton, chiết xuất nấm men, L-cystine cung cấp các yếu tố tăng trưởng cần thiết cho sự nhân lên của vi khuẩn.
- Natri thioglycolate và L-cystine làm giảm thế oxy hóa khử của môi trường bằng cách loại bỏ oxy để duy trì Eh ở mức thấp. Thioglycolate cũng có tác dụng làm bất hoạt các hợp chất thủy ngân và cũng ngăn ngừa sự tích tụ peroxit có thể gây chết một số vi sinh vật. Điều này, kết hợp với sự khuếch tán oxy từ phía trên của môi trường, tạo ra một loạt nồng độ oxy trong môi trường dọc theo độ sâu của nó.
- Sự hiện diện của 0,05% Agar giúp duy trì môi trường kỵ khí bằng cách ngăn chặn sự phân tán và thoát ra của CO2 được tạo ra bởi quá trình trao đổi chất của vi khuẩn và sự khuếch tán oxy từ môi trường.
- Nồng độ oxy ở một mức nhất định được biểu thị bằng thuốc nhuộm nhạy cảm với oxy hóa khử như Resazurin, chất này chuyển sang màu hồng khi có oxy. Điều này cho phép phân biệt vi sinh vật hiếu khí bắt buộc, vi sinh vật kỵ khí bắt buộc , vi sinh vật kỵ khí tùy ý, vi sinh vật ưa khí và sinh vật chịu được khí dung . Ví dụ, loài Clostridium kỵ khí bắt buộc sẽ chỉ phát triển ở đáy ống nghiệm.
Môi trường Thioglycollate Broth cũng được sử dụng để thu hút các đại thực bào vào khoang màng bụng của chuột khi tiêm vào màng bụng. Nó thu hút nhiều đại thực bào, nhưng không kích hoạt chúng.
Hướng dẫn đọc kết quả nuôi cấy môi trường Thioglycollate Broth
* Môi trường không đục: Vi sinh vật không tăng trưởng
* Môi trường có độ đục: Vi sinh vật có sự tăng trưởng
Vi khuẩn hiếu khí và kỵ khí có thể được xác định bằng cách nuôi chúng trong ống nghiệm chứa dung dịch môi trường Thioglycollate Broth. Theo dõi hình bên trên, từ trái sang phải:
(1) Vi khuẩn hiếu khí bắt buộc cần oxy vì chúng không thể lên men hoặc hô hấp yếm khí. Chúng tập trung ở đầu ống nơi có nồng độ oxy cao nhất.
(2) Vi khuẩn kỵ khí bắt buộc bị nhiễm độc oxy nên tập trung ở đáy ống, nơi có nồng độ oxy thấp nhất.
(3) Vi khuẩn kỵ khí tùy ý có thể phát triển có hoặc không có oxy vì chúng có thể chuyển hóa năng lượng hiếu khí hoặc kỵ khí. Chúng tập trung chủ yếu ở phía trên vì hô hấp hiếu khí tạo ra nhiều ATP hơn quá trình lên men hoặc hô hấp kỵ khí.
(4) Vi sinh vật ưa khí cần oxy vì chúng không thể lên men hoặc hô hấp kỵ khí. Tuy nhiên, chúng bị đầu độc bởi nồng độ oxy cao. Chúng tập trung ở phần trên của ống nghiệm, nhưng không ở phần trên cùng.
(5) Các sinh vật hiếu khí không cần oxy vì chúng chuyển hóa năng lượng trong điều kiện kỵ khí. Tuy nhiên, không giống như vi khuẩn kỵ khí bắt buộc, chúng không bị nhiễm độc oxy. Chúng có thể được tìm thấy trải đều khắp ống nghiệm.
Xem thêm
- Tổng quan môi trường nuôi cấy vi sinh vật
- Kỹ thuật pha loãng nối tiếp trong nuôi cấy vi sinh vật
- Tổng quan về các nhóm vi sinh vật cố định đạm
- Tổng quan về vi khuẩn
- Phân loại xạ khuẩn